>百科大全> 列表
酶标仪检测步骤
时间:2025-04-13 14:44:02
答案

酶标仪是一种实验室常用的检测工具,可以用于血清学、分子生物学、免疫学等多个领域中的试验。以下是一般的酶标仪检测步骤

1. 贴板涂覆抗原或抗体:将待检测的抗原或抗体涂覆在ELISA板的孔内,并放置恒温器中进行孵育、干燥和固定。涂覆的抗原或抗体可以根据需要选择单一的抗原或复合抗原。

2. 阻断处理:用适当的阻断剂(如BSA、牛血清蛋白等)处理孔内,以防止非特异性结合和减少白底(无背景色)的产生。

3. 加标本和标准品:加入待检测的标本或标准品,并在恒温器中孵育。此步骤的孵育时间温度可以根据试剂盒中的说明进行调节

4. 洗涤:将样本液等样品从板孔内洗掉,洗涤干净后需去除板孔残留洗涤缓冲液。

5. 加酶标记反应物:加入酶标记物,如辣根过氧化物酶(HRP,常用)或碱性磷酸酶(ALP)等,让酶标记反应物与标本或标准品结合。

6. 洗涤:将酶标记物的非特异性结合物从板孔内洗去。为了获得更准确的结果,需要将板孔清洗干净,去除残留缓冲液。

7. 反应底物和发色:加入反应底物,如TMB底物液,让反应继续发生,直至需要的发色程度产生。

8. 停止反应:通过添加酸性停止液,停止反应,并将板孔放置在酶标仪中读取吸光度结果。结果的计算方法可以根据试剂盒中的说明书进行计算。

需要注意的是,每个步骤中的操作要灌注充分,洗涤要彻底,孵育、反应时间等需要严格控制,实验中必须严格遵守操作操作规程和安全操作。

推荐
Copyright © 2025 解决知识网 |  琼ICP备2022020623号 |  网站地图